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当奶和奶制品残留有机氯化物农药的测定

发布时间:2021-09-13 11:14:35 阅读: 来源:柠檬酸厂家
当奶和奶制品残留有机氯化物农药的测定

奶和奶制品——残留有机氯化物(农药)的测定

生发灵酊剂为本部研制的一种中药复方外用擦剂,临床用于治疗脱发。处方中主含何首乌。目前测定何首乌中大黄酸的方法有HPLC法。高效毛细管电泳(HPCE)是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术,与传统的分离分析手段相比较,具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。本实验建立了HPCE内标法测定生发灵酊剂中的大黄酸,简便灵敏、结果可靠,重现性好,能满足生发灵酊的药品质量监控。

1 仪器与试药

Waters公司高效毛细管电泳仪,石英毛细管柱(60 cm×75μ m),Millennium 32数据处理系统,离心机(ABBOT,美国);大黄酸、咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所),生发灵酊剂(100 mL,批号:030612、030626、030718,自制),四硼酸钠、氢氧化钠均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 缓冲液的配制:精密称取5.74 g四硼酸钠溶于500 mL超纯水中,配成30 mmol/L四硼酸钠电泳缓冲液溶液,磷酸调pH为8.2。

2.2 电泳操作条件:分离电压为12 kV;检测波长为254 nm;进样量为50 kPa×5 S;缓冲液为30mmol/L四硼酸钠溶液(pH 8.2)。每次进样前用缓冲液冲洗毛细管柱10 min,每次分析后用0.1mol/L氢氧化钠冲洗2 min,水冲洗10 min。所用溶液均经0.45 gm纤维树脂膜滤过。上述电泳条件,得电泳图。

2.3 对照品溶液和内标溶液的配制:机台自动停机精密称取大黄酸对照品15.0 mg,置于100 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀由此也能下降15%~20%的能耗、减少涂料的用量并下降2氧化碳排放。吸取上述溶液5 mL置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,配成30ug/mL的大黄酸对照品溶液。精密称取咖啡酸对照品30.0 mg置于100 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。吸取上述溶液5 mL置25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,配成60,ug/mL的咖啡酸内标溶液。

2.4 供试品溶液的制备:精密量取生发灵酊剂10mL,加2.5 mol/L硫酸10 mL,沸水浴回流1 h,冷却,移至分液漏斗中,用氯仿分4次振摇提取(30、30、20、10 mL),合并氯仿液,水浴蒸干。残渣加甲醇适量,微热使之溶解,定量转移至50 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀。精密量取2 mI 溶液到2mL离心管中,10 000 r/min离心15 min。取上清液,用0.45 gm有机滤膜滤过,弃去初滤液,收集续滤液作为供试品溶液。

2.5 阴性对照溶液的制备:按处方比例及生产制备方法,制备不含何首乌的阴性样品,按2.4项下方法制备阴性溶液。

2.6 线性关系考察:精密吸取大黄酸对照品溶液2、4、6A. 测试标准模块化功能:提供使用者设定所需利用的测试标准设定、8、10 mL置25 mL量瓶中,分别加内标溶液5 mL,用甲醇稀释至刻度,摇匀,按上述电泳条件,分别进样5 S。以对照品质量浓度为横坐标(C),大黄酸峰面积与内标峰面积比为纵坐标(A)作图,得回归方程A=0.084 9 C-0.015 4,r=0.999 8,表明大黄酸在2.4~12μg/mL和大黄酸峰面积与内标峰面积比线性关系良好。

2.7 精密度试验:同一天配制6、12、20μg/mL大黄酸对照品溶液进行测定,另外同法在不同日内测定,分别计算日内、日间精密度。

2.8 稳定性试验:将同一对照品溶液在相同电泳条件下,分别于0、4、8、12、24 h重复进样5 S,得大黄酸质量浓度的RSD为1.92% ,表明大黄酸在24 h内测定结果稳定。

2.9 重现性试验:对同一批号样品,分别取样平行测定5次,得大黄酸质量浓度的RSD为2.01 。2.10 回收率试验:精密量取已测知质量分数的生发灵酊剂10 mL于25 mL量瓶中,分别加大黄酸对照品溶液(30μg/mL)2、4、6 mL和内标溶液2.0mL,加甲醇至刻度,依法操作,进样5 S则常常需要两组不同的充电器和电线,以大黄酸峰面积与内标峰面积比代入回归方程计算回收率。

2.11 样品测定:取生发灵酊剂3批,精密量取10mL置25 mI 量瓶中,加内标溶液2 mL,加甲醇至刻度,依法操作,进样5 S,内标法计算质量分数。

3 讨论

中药复方制剂中,所含成分复杂,采用HPLC法进行测定时,往往因杂质太多,容易污染色谱柱,使柱效降低。而采用HPCE法进行分析时,由于毛细管柱易冲洗再生,保持高效,使各成分的分离较佳。

本实验曾比较磷酸盐、硼酸-硼砂、四硼酸钠3种缓冲液,发现四硼酸钠对大黄酸的分离最理想。研究表明缓冲液浓度和pH值对分离具有重要影响。高浓度缓冲液可获得较好的分离,但保留时间会变长,而且导致通过毛细管的电流增加,从而增大焦耳热。因此,实验选用30 mmol/L四硼酸钠作缓冲液。pH值选择是决定分离成败的一大关键。采用pH为8.2的四硼酸钠缓冲液时分析时间短,峰形尖锐、对称并达到基线分离。研究表明,柱温降低分离度变好,但柱效减低,分析时间变长。综合考虑分离度和迁移行为的变化,本实验选用25 C柱温较合适。分离电压是毛细管电泳的一项重要参数,实验表明,增加组份的迁移速度是减少谱带展宽、提高分离效率的重要途径,增加电场强度可以达到提高速度的目的。但高场强度导致通过毛细管的电流增加,从而增大焦耳热。在12 kV时,分离选择性最佳。

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